Η χρωματογραφία λεπτής στιβάδας είναι μια χημική μέθοδος ανάλυσης που βασίζεται στη χρήση ενός προσροφητικού στρώματος με πάχος 0,1-0,5 mm ως στάσιμη φάση. Η μέθοδος TLC μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε διάφορα πεδία και επιτρέπει τον προσδιορισμό μιας ευρείας ποικιλίας χημικών ενώσεων.
Αρχή της μεθόδου
Η μέθοδος της χρωματογραφίας λεπτής στιβάδας γεννήθηκε από χρωματογραφία χαρτιού και τα πρώτα πειράματα πραγματοποιήθηκαν τη δεκαετία του 80 του 19ου αιώνα. Η ενεργή χρήση αυτής της ανάλυσης ξεκίνησε μόνο μετά το 1938.
Η τεχνική TLC περιλαμβάνει μια κινητή φάση (έκλουσμα), μια στατική φάση (ροφητή) και έναν αναλύτη. Η στατική φάση εφαρμόζεται και στερεώνεται σε ειδική πλάκα. Η πλάκα μπορεί να είναι κατασκευασμένη από γυαλί, αλουμίνιο ή πλαστικό - αυτά είναι επαναχρησιμοποιήσιμα υποστρώματα που πρέπει να πλυθούν καλά, να στεγνώσουν και να προετοιμαστούν για την εφαρμογή του ροφητή μετά από κάθε χρήση. Είναι επίσης δυνατή η χρήση χάρτινων πλακών που απορρίπτονται μετά τη χρήση.
Το σιλικαζέλ χρησιμοποιείται συχνότερα ως στατική φάση, αλλά είναι δυνατόν να χρησιμοποιηθούν και άλλα απορροφητικά, για παράδειγμα οξείδιο αργιλίου. Κατά τη χρήση αυτού ή αυτού του ροφητικού, η τεχνολογία πρέπει να ακολουθείται αυστηρά, ώστε το αποτέλεσμα να είναι ακριβές, για παράδειγμα, επειδή το διοξείδιο του πυριτίου μπορεί να δώσει εσφαλμένο αποτέλεσμα εάν ο αέρας στο εργαστήριο είναι πολύ υγρός.
Οι διαλύτες χρησιμοποιούνται ως κινητή φάση, για παράδειγμα νερό, οξικό οξύ, αιθανόλη, ακετόνη, βενζόλιο. Η επιλογή ενός διαλύτη πρέπει να ληφθεί υπεύθυνα, διότι το αποτέλεσμα της χρωματογραφίας εξαρτάται άμεσα από τις ποιότητές του (ιξώδες, πυκνότητα, καθαρότητα). Ένας μεμονωμένος διαλύτης επιλέγεται για κάθε αναλυθέν δείγμα.
Ανάλυση
Το δείγμα πρέπει να αραιώνεται σε διαλύτη. Εάν δεν εμφανιστεί πλήρης διάλυση και παραμένουν πάρα πολλές ακαθαρσίες, τότε το δείγμα μπορεί να καθαριστεί με εκχύλιση.
Η εφαρμογή του δείγματος στην πλάκα μπορεί να γίνει αυτόματα ή χειροκίνητα. Η αυτόματη εφαρμογή χρησιμοποιεί μια μέθοδο μικροψεκασμού όπου κάθε δείγμα ψεκάζεται στην κατάλληλη περιοχή του υποστρώματος. Για χειροκίνητη εφαρμογή, χρησιμοποιείται μικροπιπέτα. Τα σημάδια μολυβιού τοποθετούνται στην πλάκα για κάθε δείγμα. Κάθε δείγμα εφαρμόζεται με ένα τριχοειδές στην πλάκα σε μία γραμμή σε επαρκή απόσταση από τα σημάδια έτσι ώστε να μην αντιδρά με άνθρακα από το μόλυβδο.
Η πλάκα τοποθετείται σε δοχείο, στο κάτω μέρος του οποίου χύνεται το έκλουσμα. Το στήριγμα τοποθετείται με μία άκρη στο δοχείο μέχρι τη χαραγμένη γραμμή. Το δοχείο είναι ερμητικά κλειστό για να αποφευχθεί η εξάτμιση της κινητής φάσης. Κάτω από τη δράση των τριχοειδών δυνάμεων, το έκλουσμα αρχίζει να ανεβαίνει το προσροφητικό στρώμα. Όταν το έκλουσμα φτάσει σε ένα ορισμένο επίπεδο, η πλάκα αφαιρείται από το δοχείο και ξηραίνεται.
Εάν η επιθυμητή ουσία δεν έχει χρώμα, τότε δεν θα είναι ορατή στο υπόστρωμα. Επομένως, πραγματοποιείται οπτικοποίηση - επεξεργασία της πλάκας με ατμούς ιωδίου ή άλλες βαφές.
Μετά από μια τέτοια επεξεργασία, το αποτέλεσμα αξιολογείται. Έγχρωμες περιοχές ποικίλης έντασης εμφανίζονται στο ροφητή. Για τον προσδιορισμό μιας ουσίας (ή μιας ομάδας ουσιών), οι χρωματιστές περιοχές, το μέγεθος, η ένταση και η κινητικότητά τους συγκρίνονται με ένα δείγμα αναφοράς.
Η μέθοδος TLC χρησιμοποιείται ευρέως επειδή είναι γρήγορη, φθηνή, ακριβής, διαισθητική, δεν απαιτεί πολύπλοκο εξοπλισμό και είναι εύκολο να ερμηνευτεί.
